Les abstracts de la SFGM-TC

R. Ahmed Nacer, M. Benakli, F. Mehdid, R. Belhadj, M. Baazizi, N. Rahmoune, H. Belaidi, RM. Hamladji

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S.Nguyen 1,2, V.Vieillard 1, F.Norol 3, H.Trebeden-Nègre 3, M.Kuentz 4, J.Vargaftig 2, A.Bouyon 2, S.Hilpert 1 , P.Debré 1, JP.Vernant 2, N.Dhedin 2

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Michallet M1, Lê QH 1, Bilger K2, Lioure B2*, Maloisel F2, Thiébaut A1, Thomas X1, Troncy J1, Revesz D1, Ducastelle S1, Sibon D1, Raus N1, Nicolini F1

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Michallet M1,2, Lê QH1,2, Vernant JP2, Sutton L2, Nicolini FE1,2, Sutton L2, Harrousseau JL2, Colombat P2, Deconninck E2, Jouet JP2, Blaise D2

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1T Fagot, 1 B Souleau, 2C Cailliot, 3E Bey, 4JJ Lataillade, 5T Samson, , 1T Pham, 6P Gourmelon,, 1T de Revel. 1-Service d’hématologie HIA Percy, Clamart 2-Amgen France 3-Service de chirurgie plastique HIA Percy, Clamart 4-Centre de Transfusion Sanguine des Armées, Unité de Thérapie cellulaire HIA Percy, Clamart 5- Service de biologie HIA Percy, Clamart 6-IRSN, Fontenay aux Roses

Nous avons été amenés à mettre en application les recommandations de la conférence de consensus IRSN-SFGMTC des Vaux de Cernay 2003, actualisée EBMT 2005, concernant la stratégie thérapeutique des irradiations accidentelles à propos de deux cas successifs d’exposition responsable d’une aplasie médullaire sévère. Patient 1 : - Exposition aiguë à une source de 60Cobalt (stérilisateur industriel) au mois de mars 2006 - Admission à J+20 du syndrome initial - Syndrome hématologique pur : hémoglobine 8.5 g/dl, réticulocytes 0/ mm3, leucocytes 300/ mm3, plaquettes 3000/ mm3 - Dosimétrie (physique et biologique) : irradiation globale à la dose moyenne de 4.2 GY en 20 secondes avec gradient de dose antéro-postérieur et supéro-inférieur. Patient 2 : - Exposition prolongée (2 semaines) par source 192Iridium (gammagraphie industrielle) au mois d’août 2006 - Admission à J+31 du syndrome initial - Syndrome lésionnel mixte avec aplasie médullaire : hémoglobine 8.9 g/dl, réticulocytes 20 000/ mm3, leucocytes 700/ mm3, plaquettes 6000/ mm3 et atteinte localisée cutanée à type de radiodermite cutanée exsudative axillaire et scapulaire gauche - Dosimétrie biologique : exposition globale moyenne de 3.5 GY. L’évaluation dosimétrique finalisée, les patients sont admis en unité de soins intensifs d’hématologie sous flux laminaire et un traitement par facteurs de croissance hématopoïétiques, selon les recommandations formulées par le groupe de travail IRSN-SFGMTC, est débuté dans les meilleurs délais : G-CSF pégylé (Neulasta 12mg), darbepoetin alfa (Aranesp 500?g), délivrés à J1 et SCF (Stemgen 20?g/kg/j) (autorisation ATU de l’AFSSAPS) quotidien (Laboratoire Amgen). La reprise de l’hématopoïèse est observée à J31 de l’exposition et J5 du début du traitement pour le patient 1, à J37 de l’exposition et J3 du début de traitement pour le patient 2.

Ces deux observations illustrent la capacité de restauration autologue de la moelle osseuse après une irradiation accidentelle globale avec exposition hétérogène, activée par la combinaison rhG-CSF, rhEPO, rhSCF. Il faut noter ici une reprise tardive de l’hématopoïèse > J+30 post exposition pour des doses d’exposition modérées < 5Gy, délai qu’il conviendra de prendre en compte pour des expositions à doses plus élevées pouvant poser le problème de l’indication de greffe de CSH.

1T Fagot, 1T de Revel, 2E Bey, 3H Carsin, 4C Cailliot, 5JF Botollier, 3H le Bever, 1T Pham,

5P Gourmelon, 6JJ Lataillade.

1-Service d’hématologie HIA Percy, Clamart 2-Service de chirurgie plastique HIA Percy, Clamart 3-Centre de traitement des brûlés HIA Percy, Clamart 4-Amgen France 5-IRSN, Fontenay aux Roses 6-Centre de Transfusion Sanguine des Armées, Unité de Thérapie cellulaire, HIA Percy

Nous rapportons le cas d’un patient de 27 ans victime d’une irradiation accidentelle localisée à haute dose (192Iridium; gammagraphie industrielle) hospitalisé, à J+14 post exposition, avec des radio-lésions cutanées de la joue gauche, de la main gauche et de la fesse gauche. La sévérité des lésions (douleurs résistantes aux opiacés, nécrose menaçante), la capacité potentielle des cellules souches mésenchymateuses (CSM) à la réparation de nombreux tissus et nos données pré-cliniques (modèles animaux) nous ont conduit à proposer un traitement par greffe de CSM autologues (ATU délivrée par l’AFSSAPS). Les cellules mononuclées médullaires autologues sont prélevées par aspiration en crête iliaque non irradiée. Les CSM, isolées par mise en adhérence sur plastique des cellules médullaires, sont amplifiées ex vivo dans un substitut de sérum à base de surnageant de lysat plaquettaire. Un contrôle de qualité après expansion s’assure du maintien des caractéristiques phénotypiques et fonctionnelles des CSM. Nous avons associé le KGF (Képivance R; Laboratoire Amgen) par analogie à son rôle trophique dans la prévention des mucites après traitement radio-chimique à haute dose dans les hémopathies malignes : 60?g/kg/j administré par voie systémique intraveineuse 3 jours consécutifs par semaine, pendant 3 semaines. Main : (atteinte clinique : > 20 Gy). La greffe cutanée autologue est complétée par l’injection intra et péri lésionnelle de CSM (76x10e6). Evolution favorable : cicatrisation et disparition des douleurs. Fesse : (dosimétrie physique : >25 Gy ; Ø >10 cm). Une excision chirurgicale précoce de l’ensemble des tissus exposés à une irradiation supérieure à 20 Gy est suivie d’une greffe cutanée autologue. L’injection adjuvante locale des CSM (168x10e6) est proposée dans un second temps après échec de la greffe cutanée, complétée une semaine plus tard par une seconde injection (226x10e6). Evolution secondaire favorable avec prise du greffon cutané et cicatrisation. Joue gauche : (RTE émail dentaire : 8 Gy). Pas de traitement local par CSM, cicatrisation.

Conclusion : Cette observation est le premier cas rapporté d’un traitement combiné par CSM local et KGF systémique dans la prise en charge d’une radio- nécrose cutanée accidentelle. L’apport de chacune des procédures thérapeutiques dans l’évolution finale favorable est difficile à apprécier mais mérite d’être investigué expérimentalement.

Caty L, Yakouben K, Robin M, Mialou V, Galambrun C, Salmon A, Gandemer V, Méchinaud F, Bertrand Y, Jouet JP, Michel G, Bordigoni P, Dalle JH pour l’ensemble de la SFGM-TC.

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1Etienne Daguindeau; 2Pierre Tiberghien; 3Zina Chir; 1,2Eric Deconinck

1 CHRU Besançon, Hop J Minjoz, Service d'Hématologie, Besançon, F-25020 France. 2 Inserm, U645, Besançon, F-25020 France ; Univ Besançon, Besançon, F-25020 France ; EFS, BFC, Besançon, F-25020 France 3 Société Française de Greffe de Moëlle et Thérapie Cellulaire, Saint-Denis, F-93212 France

Graft versus leukaemia (GvL) mediated by the donor T cells is one of the most beneficial effect of allogeneic haematopoietic stem cell transplantation (allo HSCT). Few cases suggest that sustained allogeneic engraftment is not absolutely necessary to obtain a long-lasting anti-tumor effect. Clinical remission of refractory haematological malignancies despite donor marrow cell rejection have been reported after a myeloablative as well as after non-myeloablative conditioning regimens. In an attempt to demonstrate a potential benefit stemming from transient post BMT alloreactivity, we took advantage of the Société Française de Greffe de Moëlle et Thérapie Cellulaire (SFGM-TC) registry to document patients with an efficient and lasting GvL effect after alloSCT for malignant haematological diseases despite transient or absence of engraftment. Between June 1984 and October 2005, 53 patients with no engraftment or graft rejection and documented autologous reconstitution were identified in the data base. Eleven patients with a sustained autologous documented haematopoiesis and long lasting remission were identified. None of these recipients received a second allogeneic graft and/or donor lymphocyte infusion after the autologous recovery. The characteristics of the patients were as followed: acute leukaemia (n = 7, in CR n = 5), CML (n = 2, one in acute phase), MDS (n = 1), CLL (n= 1, progressive disease); 9 patients were in CR or chronic phase at transplantation; the conditioning regimen was myeloablative in 6 cases and consisted of a reduced intensity regimen in 2 cases. A documented engraftment of at least 3 months was observed in 4 cases while no engraftment occurred in 7 cases. A continuous complete remission (CR) was observed for 8 patients. In 3 other patients CR lasting respectively 12, 101 and 185 months was observed. The two patients transplanted with a progressive disease died after a delayed relapse (CML in acute phase and progressive CLL). The median time or CR was 79.4 months (range 7 - 185). For the CML patients CR after autologous reconstitution was not supported by imatinib treatment. While one cannot exclude that a least a proportion of the 11 patients were cured prior to BMT and/or that some of the long-lasting remissions were in relation with the conditioning regimen, this retrospective analysis data does suggest an efficient GvL effect can be observed without a sustained donor chimerism. The transient presence of donor T cells might indeed be sufficient to induce a powerful graft-versus-tumor effect.

1Maddens S; 1Malugani C; 1Bardey I; 1Chabod J; 1Tiberghien P; 2Deconninck E; 2Larosa F. 1EFS Bourgogne Franche Comté Banque de Sang Placentaire, Besançon, F-25020 France; 2CHU Besançon, Service Hématologie, Besançon, F-25020 France.

Nous décrivons ici le cas d’un patient de 37 ans présentant un syndrome myéloprolifératif associé à une translocation t(8 ;13) et un lymphome T agressif stade 4. Un transcript de fusion ZNF198(FIM)-FGFR1 est détecté dans la moelle et les ganglions. Deux unités de sang placentaire HLA 4/6 ont été recrutées l’une en provenance d’une banque étrangère et l’autre du Réseau Français du Sang Placentaire: DRB1, DQB1 alléliques identiques au patient, avec un mismatch générique au niveau du locus A et un au niveau du locus B, les mêmes mismatchs étant apportés par les deux unités. De plus les deux unités sont HLA C identiques entre elles, et haplo-identiques au patient.

La première unité (compatibilité HLA de 4/6, CNT : 0,3.107/kg ; CD34 : 0,02.106/kg ; CFU GM : 0,97.104/kg), non miniaturisée, s’est rompue en deux lors de la sortie d’azote liquide, a été reconditionnée sous hotte pour poursuivre la décongélation (viabilité 27%). Le contrôle microbiologique à 24h a révélé un Staphylococcus aureus coagulase négatif. La seconde unité (compatibilité HLA 4/6, CNT : 1,38.107/kg ; CD34 : 0,03.106/kg ; CFU GM : 0,65.104/kg) a été décongelée (viabilité 74%) et injectée 12 heures après la première, sans incident.

Le patient sort d’aplasie (40 jours, plaquettes>20 G/l et 45 jours, neutrophiles>0,5 G/l). Il est en chimère totale 3 mois après greffe avec le profil de la première unité. Une augmentation des cellules CD4+CD45RA+ suggère une reprise d’une thymopoïèse de novo à partir de 6 mois post greffe. La quantification du transcrit dans la moelle démontre une réduction de 3 log avec une détection inférieure au seuil minimum quantifiable à un an post greffe. Le patient présente plus de 500 CD4/?l avec un rapport CD4/CD8 normalisé à 1,3 18 mois après greffe sans signe de GvH. Aucun lien ne peut être fait entre les décomptes à la décongélation des cellules nucléées totales, ou des CD34 et la prise préférentielle de la première unité greffée. La numération des CFUGM est peu informative, au vu des données pré-décongélation (8x10E4) du laboratoire étranger et post-décongélation (46x10E4) obtenues par notre laboratoire, reflétant l’absence de standardisation de cette technique. De façon intéressante, les typages alléliques de classe I ont montré que la seconde unité avait un mismatch allélique supplémentaire pour l’allèle HLA-A*02 générique identique. Le patient va bien à ce jour.

Yin-Ping Li 1,2 *, Sophie Paczesny 3,4 *, Evelyne Lauret 5, Sonia Poirault 5, Pierre Bordigoni 3, Jing-Ping Ou-Yang 2, Jean-Francois Stoltz 1, Assia Eljaafari 1

• These 2 authors contributed equally to this work

1 Laboratory of Mechanobiology and Engineering of Cells and Tissues, CNRS UMR 7563, Faculty of Medicine, Nancy and Unit of Cellular and Tissue Therapy CHU Nancy, 54511 Nancy, France 2 Department of pathology and pathophysiology, Wuhan University, China 3 Hematology Department, Children Hospital, CHU Nancy, 54511 Nancy, France 4 Department of Internal Medicine, University of Michigan Cancer Center, Ann Arbor, MI,48105, USA. 5 INSERM U362 - Institute Gustave Roussy, 94805 Villejuif, France

The influence of bone marrow stroma on dendritic cells (DC) is mostly unknown. Mesenchymal stem cells (MSC), which are part of the bone marrow stroma, have been shown to inhibit interstitial DC differentiation from monocytes and umbilical CD34+ hematopoietic stem cells (HSC), without affecting Langerhans cells. Here, we show that MSC halt both interstitial DC and Langerhans cell differentiation from adult CD34+HSC, as assessed by the decreased expression of CD1a, CD14, CD86, CD80 and CD83 antigens on their cell surface. Accordingly, the functional capacity of these adult CD34-DC to stimulate alloreactive T cells was impaired, as well as IFN-gamma secretion and expression of activation markers in alloreactive T cells. Furthermore, we showed that (i) MSC inhibited commitment of CD34+HSC into immature DC, but not maturation of CD34-DC (ii) this inhibitory effect was reversible and (iii) T cell unresponsiveness mediated by MSC-DC was related to T cell anergy and generation of IL-10-producing T cells. This inhibition was mediated by cell-to-cell contact and secretion of soluble factors. Finally, IL-10, but not IL-12 mRNA levels were markedly upregulated in MSC-DC. In conclusion, our data suggest that MSC may drive both adult interstitial DC and Langerhans cell precursors to differentiate into regulatory IL-10+DC.

David Laurin *Eric Spierings, *Lars T. van der Veken, Abdelbasset Hamrouni,J.H. Frederik Falkenburg, Gerard Souillet, Corine Vermeulen, Annie Farre, Claire Galambrun, Dominique Rigal, , Yves Bertrand, Els Goulmy, and Assia Eljaafari. Cell Therapy Department, Etablissement Fran&#231;ais du Sang R&#233;gion Rh&#244;ne-Alpes, Immunology unit ; Hospices Civils de Lyon- bioMerieux Mixed Research Immunogenomics Unit, 69437 Lyon Cedex 03, France, The Department of Immunohematology and Blood Transfusion, and the Laboratory of Experimental Hematology, Leiden University Medical Center, Leiden, The Netherlands; The Department of Experimental Hematology, Leiden University Medical Center, Leiden, The Netherlands; INSERM U524, Lille, France he Department of Hematology, H&#244;pital Debrousse, Lyon, France; and The Department of Immunology, H&#244;pital Lyon-Sud, France

• David Laurin and Eric Spierings contributed equally to this study

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Assia Eljaafari1, Jacques Van Snick2, Alice Voisin1, Françoise Cormont2, Annie Farre1, Jacques Bienvenu3, Jeanine Bernaud4, Dominique Rigal4, and Xavier Thomas5

1Cell Therapy Research Department, EFS-Rhone-Alpes, Lyon, France and; 2Ludwig Institute for Cancer Research and Experimental Medicine Unit, Catholic University of Louvin, Brussels, Belgium; 3Immunology Department, CHLS-CHU Lyon; 4Immunology Department,EFS-Rhone-Alpes, Lyon, France; and 5Hematology Department, Hopital E. Herriot, France.

We have previously reported that alloreaction can lead to activation of dendritic cells through secretion of inflammatory cytokines. Here we addressed whether alloreaction-derived cytokines may also lead to Acute myelogenous leukemia (AML) blast differentiation. With this aim, supernatant harvested from major or minor histocompatibility antigen-mismatched mixed lymphocyte reaction (MLR) were used to culture French American Bristish (FAB) type M4 or M5 AML blasts. Our results showed that the secreted factors induced up-regulation of CD40, CD54, and/or HLA molecules in AML blasts. Protein fractionation, blockade experiments and exogenous cytokine reconstitution demonstrated the involvement of TNF in the up-regulation of CD54, CD40, and HLA-class II molecules, and of IFN-gamma in the increase of HLA-class I and class II molecule expression. But, in line of its much higher levels of secretion, TNF-beta, rather than TNF-alpha, was likely to play a preponderant role in AML blast differentiation. Moreover TNF-beta and IFN-gamma were also likely to be involved in the AML blast differentiation-mediated by HLA-identical donor T cell alloresponse against recipient AML blasts. In conclusion, we show herein that upon allogeneic reaction, TNF-beta secretion contributes, in concert with IFN-gamma, to increase or restore surface molecules involved in AML blast interaction with T cells. Leukemia in Press

Na Li1, , P Feugier2, B Serrurrier1, V L Canard2, JF Leseve2, JF Stoltz1, , A Eljaafari1, 3 1 Laboratoire d’Ingénierie et Thérapie Cellulaire et Tissulaire, UMR CNRS 7563 and IFR111, Faculté de Médecine, Université Henri Poincaré 54511 Vandoeuvre-lès Nancy, France 2 Hématologie Adulte CHU Brabois 54511 Vandoeuvre-lès Nancy, France 3 Immunogenomics Unit HCL/Biomerieux, Lyon, France

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Ducastelle S., Revesz D., Troncy J., Mahmoudi S., Thomas X., Thiébaut A., Nicolini F., Tavernier E., Le Q., Chelgoum Y., Praire A. and Michallet M. Department of Haematology, Edouard Herriot Hospital, Place d’Arsonval, 69437 LYON Cedex 03, FRANCE. Multiple myeloma (MM) remains incurable and specially of poor prognosis in case of refractory or relapsed disease. However, recent therapeutic advances are promising. Although, bortezomib, new proteasome inhibitor, has proven its efficacy in patients with refractory or relapsed MM, it has to be evaluated in the setting of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. We report four cases of MM patients, very heavily pre-treated and all previously allo-transplanted, who received bortezomib associated to dexamethasone for relapse after allogeneic reduced-intensity conditioning hematopoietic stem cell transplantation (RICT). We studied the feasibility, efficacy and safety of bortezomib. After this treatment, three patients achieved a complete remission, and one a very good partial response. The tolerance was excellent and no GVHD recrudescence was observed. Relapse after bortezomib treatment completion questions about the potential benefit of maintenance therapy with bortezomib in this allogeneic setting. Indeed, in this serie, we observed very long responses thank to a maintenance therapy with degressive doses of bortezomib. Given the feasibility and the high efficacy of bortezomib with dexamethasone in relapsed MM after RICT, new strategies combining RICT and bortezomib are warranted to increase and maintain an adequate response.

JR. PALLANDRE, A. RADLOVIC, P. TIBERGHIEN, C. BORG

INSERM U645, IFR133, EFS – BFC, oncologie médicale, Besançon, France.

Les cellules dendritiques matures (DCm) peuvent induire les fonctions effectrices des cellules lymphocytaires à cytotoxicité naturelle (NK). L’activation des cellules NK par les DCm dépend de l’organisation d’une synapse immunologique (DCNK-IS) entre NK et DCm (Borg C et al. Blood 2004). L’objectif de l’étude est de définir à un niveau moléculaire les mécanismes régulant les interactions synaptiques entre les DCm et les NK autologues. Nous avons étudié dans un système humain, les interactions entre des DCm exprimant HLA-Cw4 et des NK autologues KIR2DL1. Nous avons analysé les fonctions cytotoxiques NK, la production d’interféron &#947; et la formation de synapses immunologiques par microscopie confocale. La coculture des DCm et des NK autologues permet la production d’interféron &#947; et favorise les fonctions cytotoxiques NK. L’étude de la synapse DCNK-IS montre que les récepteurs KIR2DL1 sont exclus de la synapse. Dans un second temps, nous avons montré que les cellules de Langerhans (LC) mis en coculture avec des NK ne permettent pas une activation des NK malgré une sécrétion d’IL12 par les LC. Ces données ont permis de mettre en évidence une molécule exprimée par les DCm et non par les LC. Cette molécule appartenant à la famille des chémokines est la fractalkine (CX3CL1). En effet, la neutralisation de la fractalkine lors d’une coculture DC-NK diminue d’un point de vue fonctionnel la production d’interféron &#947; et la cytotoxicité des cellules NK ainsi que le nombre de conjugués. Par microscopie confocale, nous avons montré que CX3CL1 intervient dans l’organisation des synapses DC-NK. La neutralisation de CX3CL1 induit le recrutement de KIR2DL1 et de SHP-1 dans la synapse immunologique et prévient la réorganisation du cytosquelette. De plus nous avons étudié la formation des synapses constituées entre les lymphocytes T CD4 et les DCm. La neutralisation de la fractalkine abolit également l’organisation des synapses DC-T. Les interactions entre DC-lymphocytes étant requises pour l’initiation des GvH aigues, nous avons évalué l’influence de la fractalkine dans un modèle murin de d’allogreffe de CSH. L’absence du récepteur de la fractalkine sur les lymphocytes T du donneur (souris C57BL/6) prévient l’apparition de la GvH sans altérer l’effet anti-tumoral de l’allogreffe de cellules souches hématopoïétiques.